：研(yan)究(jiu)的是(shi)蛋(dan)白质(zhi)在(zai)体(ti)内自(zi)然(ran)状态(tai)下的相互作用(yong)，无法(fa)确定这(zhe)些(xie)相互作用是直接还是间接的。

：通(tong)过特(te)异(yi)性结合抗原和(he)抗体的(de)方(fang)式，可(ke)以(yi)利用抗体将(jiang)目(mu)标(biao)蛋白分(fen)离或(huo)纯(chun)化(hua)，并且(qie)可以检(jian)测(ce)特定蛋白(bai)的表达(da)情况(kuang)。

 

 

、Co-IP简单介(jie)绍(shao)

 

 

 

、Co-IP 原理(li)

ProteinA/G

能够(gou)选(xuan)择(ze)性(xing)地(di)结合(he)到(dao)免(mian)疫球(qiu)蛋白的 FC 由于片(pian)段(duan)的存在，它(ta)能(neng)够结(jie)合抗体并(bing)捕(bu)获(huo)复合物。抗(kang)体结合目标蛋白，使得目标蛋白与(yu)相(xiang)互(hu)作用的蛋白结合在一(yi)起(qi)。

代(dai)表(biao)复(fu)合物(wu)。

 

 

基(ji)本原理

 

 

、Co-IP 流程(cheng)

①样品(pin)准(zhun)备(bei)

 

 

②蛋白抽提(ti)

使(shi)用含(han)有(you)适(shi)量(liang)蛋白酶(mei)抑(yi)制(zhi)剂的细胞裂(lie)解(jie)液(ye)，在冰上(shang)进(jin)行(xing)细(xi)胞(bao)裂(lie)解，并得(de)到互作(zuo)蛋白复合物后(hou), 于4°C， 13000rpm条(tiao)件(jian)下，离(li)心(xin)30 min，取(qu)上清(qing)，即(ji)为(wei)总(zong)蛋白样品。

 

 

③体系孵育(yu)

 

 

④体系(xi)洗涤(di)

 

 

⑤检测

电(dian)泳(yong)→转(zhuan)膜(mo)→封(feng)闭(bi)→洗(xi)膜→一抗孵(fu)育→洗膜→二抗孵育→洗膜→显影曝(pu)光(guang)

 

 

、Co-IP结果分析(xi)

 

 

、Co-IP 拓展(zhan)

注(zhu)意(yi)事(shi)项(xiang)：

①温(wen)和的裂解条件

②使用明确的抗体

③使用对(dui)照(zhao)抗体

 

 

 

、Co-IP实验优(you)点(dian)

翻(fan)译(yi)修(xiu)饰(shi)后的蛋白质在相互作用时(shi)处(chu)于其天(tian)然状(zhuang)态。蛋白质的相互作用发生(sheng)在自然混(hun)合的蛋白质状态下，避(bi)免了人(ren)为因(yin)素(su)的影(ying)响(xiang)。可以分离出(chu)天然状态的相互作用蛋白复合物。

 

 

、Co-IP实(shi)验缺(que)点

可能无法检测到亲和性较(jiao)低(di)和瞬(shun)间产(chan)生的蛋白质－蛋白质之间可以相互作用，它们(men)的结合不一定(ding)是直接(jie)发(fa)生的，可能需(xu)要(yao)第三(san)种(zhong)蛋白质作为桥(qiao)梁起到连接的作用。为了(le)选择最(zui)终用来(lai)检测的抗体，必(bi)须(xu)在实验(yan)之(zhi)前(qian)预测目标蛋白质的身份(fen)，如(ru)果预(yu)测不(bu)准确(que)，实验就无(wu)法产生结果。